agarose gel electrophoresis

定义：用琼脂糖凝胶作支持物的电泳法。借助琼脂糖凝胶的分子筛作用，核酸片段因其分子量或分子形状不同，电泳移动速度有差异而分离。是基因操作中常用的重要方法。

学科：生物化学与分子生物学_方法与技术

相关名词：琼脂糖 电泳 迁移速率 溴化乙锭

图片来源：视觉中国

【延伸阅读】

琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖为支持介质，利用DNA分子的电荷效应和分子筛效应，实现分离、鉴定和纯化DNA的技术。DNA分子在pH值高于其等电点的溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速率取决于分子筛效应，即分子大小和构象。琼脂糖凝胶具有网格结构，分子量较大的DNA分子泳动时受到的阻力较大，分子量较小的DNA分子受到的阻力较小。因此不同分子量的DNA的迁移速率不同，并且与其相对分子质量成反比。另外DNA的分子构象也可影响其迁移速率，相同分子量的DNA，超螺旋共价闭环质粒DNA迁移速度最快，线性DNA其次，开环DNA最慢。

琼脂糖凝胶电泳的操作流程包括：配制凝胶、上样、电泳、观察结果。

1.配制凝胶：琼脂糖凝胶浓度通常在0.5%~2%之间，低浓度琼脂糖凝胶用来进行分子量较大DNA的分析，高浓度琼脂糖凝胶用来进行分子量较小DNA的分析。琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2~20kb，约可区分相差100bp的DNA片段。

2.上样：样品与上样缓冲液混匀后加入到加样孔中。上样缓冲液含有溴酚蓝、蔗糖和甘油，溴酚蓝起到指示样品迁移过程的作用，蔗糖和甘油可增加样品密度，使样品沉入样品孔底部。

3.电泳：电场强度一般为3~5V/cm（两电极间距离），在一定范围内，低电压下分离效果较好。

4.观察结果：荧光染料溴化乙锭（EB）可以嵌入DNA双链的配对碱基之间，形成EB-DNA络合物，在紫外线照射下，发出红色荧光。需要注意的是，EB是一种强诱变剂，具有毒性，在操作过程中须加以防护。实验人员也可以选取相对安全的核酸染料来替代溴化乙锭。

（延伸阅读作者：东北师范大学生命科学学院 张帆博士）

责任编辑：张鹏辉